怎样制作PDA培养基
来源:网络收集 点击: 时间:2024-07-27准备工作:首先是准备好试管、棉塞等基本物品,在根据实际情况准备配方材料,本文用于举例的使用量为土豆200g,葡萄糖20g,琼脂10g,磷酸二氢钾3.0g,七水硫酸镁1.50g,自来水适量,自然PH。


称取药品与提取土豆:计算好实际药品的用量后,用电子天平称取土豆、葡萄糖、琼脂,用分析天平称取磷酸二氢钾和七水硫酸镁。按配方放入烧杯中。将土豆洗净并去皮,称量其质量。再将其切成小块放入锅中,加水1200ml,在电磁炉上按烧水键加热至沸腾,然后调100℃保持15分钟,趁热用4层纱布过滤,把滤液加入上面的烧杯中。

加热溶解:上述的滤液会溶解部分药品,但是还有大部分药品没有溶解,所以我们需要把烧杯放入水浴锅中(95℃以上加热,并用玻璃棒不断搅拌,待琼脂完全溶解后,在补充水至1000ml)。
4/9装试管:可用带胶帽的移液管移取,同时应尽量避免培养液沾在试管口,以免造成污染。我们可以把烧杯放在热水的锅中,这样可以避免我们在装样时培养液会凝固的问题。固体培养基分装的量一般为试管高度的1/5,这样可以使得灭菌后制成的斜面比较满足条件——斜面占试管的一半。
5/9加棉塞:当第四步完成以后,接下来需要在试管口塞上棉塞,以防止外界微生物进入培养基内造成污染,同时能够保证其中有良好的通气能力。
6/9集中:将全部试管用棉绳捆好放入烧杯中,再在整个棉塞外包扎一层纸,用棉绳扎紧,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞和棉塞冲出。
7/9灭菌处理:使用高压蒸汽灭菌锅灭菌,在121℃,105kpa压力下灭菌15分钟。在使用前注意向高压蒸汽灭菌锅中加入适量的水,同时要使测温棒浸没。
8/9倒斜面:将灭菌后的试管趁热斜置于棍条上,倾斜度以试管中的培养液占试管长度的1/2为宜,凝固2个小时后即成斜面培养基(琼脂95℃溶解、40℃凝固)。


无菌检查:将灭菌冷却后的培养基放入25℃恒温培养箱内培养48小时,若培养基上无杂菌生长,则可以低温保存备用。
注意事项只要按步骤做下去,总会做 成培养基的。
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