以昆虫、蚯蚓、蜗牛甚至老鼠等为食。

多数蜥蜴以昆虫及部分啮齿类为食，偶食家禽，其牙尖锐，具3个牙尖。草食性者(如鬣蜥)的牙冠宽，呈叶状，具锯齿状切缘。以软体动物、甲壳动物为食者(如凯门蜥属〔Dracaena〕)于腭後部有钝圆的牙用以碾碎。美国西南部的希拉毒蜥(Gila monster)及其墨西哥近缘种(Heloderma属)有毒。

多数蜥蜴昼间活动，壁虎多在薄暮至破晓之间活动，并能发出大声(而大部分蜥蜴不能发声)。蜥蜴的捕食方式为静候或搜寻。许多蜥蜴能将尾部自割，断下的尾能迅速扭动以分散捕食者的注意，蜥蜴得以逃脱。许多蜥蜴有领域行为(包括领域表演)或求偶表演。

许多种有股孔，可能用来分泌化学物质以吸引异性。蜥蜴对于人的经济意义不大。某些鬣蜥可食，有些可制革。壁虎栖于居室，可捕害虫，但可能传播沙门氏菌。蜥蜴是生物学的重要研究材料，又常饲为玩赏动物。