订阅菌落的原位杂交法的具体步骤
来源：网络收集 点击： 时间：2024-05-05【导读】：
最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于菌落的原位杂交法的具体步骤的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。方法/步骤1/6分步阅读
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注意事项
首先，将分散再若干个平板上的少数菌落均匀点接到一个主平板上，并接上一个含有非重组质粒的转化子作对照，在37摄氏度下培养过夜，使菌落密度适中。
2/6然后，将硝酸纤维素膜剪成比平板稍小的圆片，覆盖在平板上，在37摄氏度下培养1-小时，此时薄膜上已经沾有足够的菌体，用针在膜上不对称地扎三个小孔，同时在平板上作出相应的标记。
3/6然后，用平头镊子将滤膜轻轻的揭起，将主平板保存在4摄氏度下的冰箱中。
4/6然后，将膜吸附菌体的一面朝上，放置在预先被变性溶液浸湿的普通滤纸上，变性溶液的强碱可以裂解细菌，释放细胞内含物，降解RNA，并使蛋白质和DNA变性。
5/6然后，在十分钟后将硝酸纤维素膜转移至预先被中性缓冲液浸湿的普通滤纸上，室温保持五分钟，硝酸纤维膜与单链DNA或RNA的吸附作用比双链核酸和蛋白质强。
6/6最后，将硝酸纤维素膜转移到2*SSC缓冲液中，进行短暂的浸泡三分钟，以洗去菌体碎片和蛋白质。
注意事项上述方法为小编整理所得，希望能够帮助到大家。
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