游戏开始前需要确定主角的名字，这里就使用默认的Desmond。游戏开始是一段关于前两部《刺客信条》的回忆。动画之后，古代的主角Ezio身处一场战斗之中。根据系统提示不断按鼠标左键，攻击敌人的首领。但是最后还是会被他躲开。接着镜头会切换。

1499年12月 IL Vaticano

按WASD控制角色的移动。控制角色朝前走，在前面金属杖那边会有动画。平台降了下去，同时主角的叔叔出现。按E键进入EAGLE VISON，就可以看到发光的指示物。跑过去，然后按住鼠标右键和空格键，还有方向键就可以爬上去。爬上去后按WASD来移动，向上爬。

爬上去后，一路跟着叔叔前进。按住鼠标右键可以跑动，按住SHIFT键可以推开路上的人群。

从屋子里面出来后会开始遇到敌人，按鼠标左键攻击，按住鼠标右键进行格挡。

然后一路跟着Mario叔叔前进。按住鼠标右键和空格键可以快速跑动或跳跃，攀爬。注意从高处跳下是会少血的，跳进草堆中就没事了。同时还需要干掉路上出现的敌人。

最后两人爬上了河边一幢房子的塔顶，然后跳入河中离开。

1500年1月 Monteriggioni

Ezio骑着马跟随叔叔回家乡的城镇。进入城里后，来到主角的家中。

Ezio与妹妹相见后，需要先去完成3个小任务然后再回家。右下方的小地图中会有3个感叹号的可接任务标记。一个任务是帮助妇女搬花，按E键对话。接着按Shift键搬起花之后跟着妇女到达指定地点。